對不起請問一下
我在做HPLC時
以甲醇在清洗管柱時, UV檢測器的數值會上下據烈的跳動由0.9X到-0.9X!!!
為何會這樣呢?
在先前進行試驗時不會如此,但最近會發生如此怪異現象!?
是樣品的問題?
是沖提溶劑的問題?
是管柱的問題?
還是UV檢測器的問題?
能否麻煩幫我解答, 感激不盡!!
謝謝
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以甲醇在清洗管柱時
第1 篇回應文章
回應者:吳健三
回應時間:2010/1/19 下午 03:32:32
您起始移動相為水:甲醇=10/90，60分鐘後改變為水:甲醇=90/10，不論Isocratic或Gradient作法，移動相由高溶洗的甲醇比例，降為低甲醇比例，似乎不符合逆相層析法，C18,C8...操作法則。
請您再確定一次移動相內容比例增變條件，再討論。
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回應者:吳健三
回應時間:2010/1/19 下午 03:32:32
您起始移動相為水:甲醇=10/90，60分鐘後改變為水:甲醇=90/10，不論Isocratic或Gradient作法，移動相由高溶洗的甲醇比例，降為低甲醇比例，似乎不符合逆相層析法，C18,C8...操作法則。
請您再確定一次移動相內容比例增變條件，再討論。
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第2 篇回應文章
回應者:afu
回應時間:2010/1/19 下午 03:33:24
如果我的水:甲醇=10:90, 60分鐘後為水:甲醇=90:10, 流速為0.8ml/min, 而你所說的120ml是應洗多久才可以呢,因為我的管柱已洗了好久了,可是一直洗不乾淨, 問題一直存在著,那該怎麼做?繼續洗, 還是換支管柱, 還是有其他方法??
謝謝
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回應者:afu
回應時間:2010/1/19 下午 03:33:24
如果我的水:甲醇=10:90, 60分鐘後為水:甲醇=90:10, 流速為0.8ml/min, 而你所說的120ml是應洗多久才可以呢,因為我的管柱已洗了好久了,可是一直洗不乾淨, 問題一直存在著,那該怎麼做?繼續洗, 還是換支管柱, 還是有其他方法??
謝謝
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第3 篇回應文章
回應者:吳健三
回應時間:2010/1/19 下午 03:34:31
您可能採用C18或C8...逆相層析管柱，您沒有提到最後分析的移動相的內容與比例，因此我們猜想:
1.假使你最後分析移動相只是甲醇(乙晴)與水調和，(沒有酸、鹽調和)結束分析，用甲醇流洗層析管柱，在檢測出現混亂"吸收值Absorbance"，說明您注入分析，當時的移動相未能將分析物全部溶洗帶出，當時殘存被保持於管柱內。當高溶洗的甲醇，流洗時，則將之該等殘存持續溶洗出，在檢測器一時出現混亂吸收值。按一般甲醇流洗約120ml，大致上可將管柱流洗乾淨，而有穩定的吸收值。
2.假使您最後移動相是水相調和酸，或鹽類、分析畢，直接甲醇流洗，非常不好，此時吸光值仍然是混亂值，建議您先用MeOH/H2O=20/80先流洗約120ml，再將甲醇流洗約120ml即可。基本上，您所擔心的，那些都不是問題。
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回應者:吳健三
回應時間:2010/1/19 下午 03:34:31
您可能採用C18或C8...逆相層析管柱，您沒有提到最後分析的移動相的內容與比例，因此我們猜想:
1.假使你最後分析移動相只是甲醇(乙晴)與水調和，(沒有酸、鹽調和)結束分析，用甲醇流洗層析管柱，在檢測出現混亂"吸收值Absorbance"，說明您注入分析，當時的移動相未能將分析物全部溶洗帶出，當時殘存被保持於管柱內。當高溶洗的甲醇，流洗時，則將之該等殘存持續溶洗出，在檢測器一時出現混亂吸收值。按一般甲醇流洗約120ml，大致上可將管柱流洗乾淨，而有穩定的吸收值。
2.假使您最後移動相是水相調和酸，或鹽類、分析畢，直接甲醇流洗，非常不好，此時吸光值仍然是混亂值，建議您先用MeOH/H2O=20/80先流洗約120ml，再將甲醇流洗約120ml即可。基本上，您所擔心的，那些都不是問題。
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第4 篇回應文章
回應者:吳健三
回應時間:2010/1/19 下午 03:35:27
若您在甲醇/水=90/10之高有機移動相之下，某些分析物仍會殘存層析管柱，建議您分析畢用，甲醇/THF=50/50，流洗約100ml，再以甲醇流洗，約50ml即可。
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回應者:吳健三
回應時間:2010/1/19 下午 03:35:27
若您在甲醇/水=90/10之高有機移動相之下，某些分析物仍會殘存層析管柱，建議您分析畢用，甲醇/THF=50/50，流洗約100ml，再以甲醇流洗，約50ml即可。
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